De professor en Luke staan voor een nieuw raadsel als de jonge zangeres Janice Quatlane hen vertelt dat ze de geest van haar overleden vriendin heeft gezien. Gentleman als Layton is, kan hij deze jongedame in haar verwarring niet in de steek laten. Om het mysterie op te lossen gaan Luke en de professor naar het wereldberoemde operahuis ‘Crown Petone’. Daar gaat de laatste opera van de geniale componist Oswald Whistler in première. Daar, blijkt de voorstelling uit te lopen op een angstaanjagend spel: de winnaar maakt kans om onsterfelijk te worden! De sleutel tot dit raadsel ligt blijkbaar in het eeuwige leven…
In deze fantastische productie worden de talenten van Masakazu Kubo (Pokémon) en Akihiro Hino (maker van de game) verenigd in een feature film met alle karakters uit de beroemde saga.
